La subfamilia Phlebotominae está compuesta principalmente por los géneros Lutzomyia y Phlebotomus, vectores principales de patógenos virales, bacterianos y protozoarios. Desde los años 90 marcadores moleculares han ayudado a abordar problemas dentro del taxón, como por ejemplo: determinar la estructura genética, resolver conflictos sistemáticos, especiación, co-evolución de parasito y vector. Esta revisión pretende crear un compendio de la investigación realizada con marcadores moleculares en este grupo taxonómico, para así facilitar el trabajo de investigadores que pretenda identificar marcadores y el análisis de datos apropiados para responder sus preguntas. La tendencia principal encontrada fue el uso de ADN mitocondrial como marcador molecular, la secuenciación de ADN como técnica de caracterización y el análisis filogenético como método de análisis predilecto. La mayoría de los estudios revisados se centran en la especie Lutzomyia longipalpis, vector principal de leishmaniosis visceral en las regiones tropicales de América, y Phlebotomus papatasi vector principal de leishmaniosis cutánea en Europa, Asia y América. Los problemas taxonómicos y las descripciones de estructura genética fueron los problemas más abordados por los investigadores, seguidos por la resolución de conflictos sistemáticos. La investigación a futuro empleando marcadores moleculares en flebotomíneos deben apuntar hacia: el desarrollo de barcoding genético como técnica complementaria a la identificación morfológica y la secuenciación de genomas para así avanzar en el área de relaciones parasito-vector.

The subfamily Phlebotominae is principally composed of the Lutzomyia and Phlebotomus genera: the main vectors of several protozoan, bacterial and viral pathogens. Since the 1990’s molecular markers have enabled us to effectively address many issues concerning this taxon by, for example, solving systematic conflicts, increasing our understanding of speciation and host-parasite co-evolution, and determining the genetic structure of populations. In this paper we review the research undertaken using molecular markers in this taxonomic group. We hope that this will make it easier for scientists to identify markers and data analyses appropriate to their particular research interests. The principal trends we found are a move towards the use of mitochondrial DNA as molecular markers, DNA sequencing as the characterization method of choice, and phylogenetic analysis for analyzing the data. Most of the studies reviewed center on Lutzomyia longipalpis, the main vector for visceral leishmaniasis in the American tropics and Phlebotomus papatasi, the main vector for cutaneous leishmaniasis in Europe, Asia and Africa. Taxonomic problems and the description of genetic structure are the issues most addressed by researchers, followed by resolving systematic conflicts. Future research using molecular markers in the study of sandflies should be aimed towards: a) the development of genetic barcoding as a complementary tool for morphological identification and b) genome sequencing to increase our understanding of host-parasite interactions.

Los flagelados del género Herpetomonas sp. son parásitos de insectos, y generalmente no son patógenos para el hombre. Sin embargo, tienen importancia médica en la actualidad derivada en primer lugar del uso de varias especies de moscas en terapia larval, desde las cuales han sido aisladas, ejemplo Musca domestica, y en segundo lugar dado a los nuevos registros de casos humanos de co-infección de VIH y Herpetomonas sp., pero con una clínica y sintomatología semejante a la leishmaniasis tipo visceral y cutáneo-difusa. En el presente trabajo, se evalúo un material de colonia de M. domestica, colectado en la localidad de Maracay, Edo. Aragua, y colonizado con fines de terapia larval en un modelo animal de leishmaniasis. La búsqueda parasitológica en frotis preparados a partir de los macerados del tubo digestivo, evidencia la existencia de Herpetomonas sp. y Octosporea sp. en un 90% de los ejemplares evaluados en diferentes estadios de vida, y a todo lo largo del tracto digestivo. Los resultados obtenidos indican la necesidad de evaluar a priori el material de moscas colectado en el campo antes de estabilizar una colonia con fines de terapia larval. Adicionalmente, se recomienda el uso de herramientas moleculares para el diagnostico de leishmaniasis en zonas de alta casuística de SIDA y alta endemicidad de leishmaniasis con el fin de descartar infecciones cruzadas, dado a la co-circulación de Herpetomonas y Leishmania.

Herpetomonas are insect parasites. Although they usually are not pathogenic to man, now they have become very important due to the use of barium species of flies in larval therapy and there are new reports of HIV coinfection of Herpetomonas sp. in whom a similar clinical symptoms and one which causes visceral leishmaniasis and diffuse cutaneous leishmaniasis. From a colony of Musca domestica, mounted in the city of Trujillo Venezuela, took out the search of the protozoan along the entire digestive tract of adult and immature, resulting Herpetomonas positive. sp 90% of those reviewed. The presence of parasites, both Herpetomonas spp. as Octosporea sp. was confirmed by Giemsa staining of smears from intestinal homogenates of adult flies and immature stages. We recommend the use of molecular tools for diagnosis of leishmaniasis in areas of high incidence of AIDS and leishmaniasis are endemic to rule out cross-infection.

Colectas e identificaciones realizadas en un área de transmisión malárica en el estado Sucre, Venezuela, mostraron mediante el uso de las claves ad hoc, la posible presencia en simpatría de poblaciones de Anopheles aquasalis Curry y An. benarrochi Gabaldón, Cova-García & López. Adicionalmente, se detectaron poblaciones de individuos que mostraron mezcla de los caracteres diagnósticos señalados en las claves. Debido a la importancia epidemiológica que representan ambas especies en dicha zona malárica, este estudio se orientó hacia la determinación de las tres entidades señaladas, mediante filogenia molecular con las secuencias de ADN mitocondrial (region Citocromo Oxidasa 1). En este sentido, el concepto de especie filogenética fue evaluada utilizando análisis de parsimonia máxima que mostraron politomías (nodos no resueltos) fuertemente apoyadas entre las secuencias inclusive la del haplotipo proveniente de un macho identificado como aquasalis, mostrando hipótesis (árboles) totales sin resolución ni apoyo de grupos internos con los tres morfotipos como un grupo natural único. Las distancias genéticas (Kimura-2P) mostraron que la variablidad inter-morfotipos están dentro de la varianza intra sugiriendo que los haplotipos problema son una única entidad polimórfica y con plasticidad fenotípica. Se concluye que An. aquasalis es la entidad única de las poblaciones estudiadas y que los caracteres morfológicos como: 1) vena Medial con escamas negras y 2) palpos maxilares con superficie ventral cubierta de escamas blancas, que son propuestas en la mayoría de las claves no son caracteres válidos para la identificación de hembras de An. benarrochi y que tales caracteres forman parte de la variación intraespecífica en An. aquasalis. Esta conclusión apoya la revisión de Faran (1980), quién no propone caracteres diferenciales para hembras de ambas especies, siendo indistinguibles por medio de los caracteres morfológicos tradicionalmente utilizados.

Collected specimens from a malaric area in Sucre State, Venezuela, using the ad hoc Keys, were identified as Anopheles aquasalis Curry and An. benarrochi Gabaldón, Cova-García & López populations. Additionally, other individuals have shown a mixture of diagnostic characters of both species. As a consequence of the epidemiological importance that both species represent in this malaric area and its correct identification for vector control aims, we addressed the research to the determination of both entities by mean of phylogenetic methods using mitochondrial DNA (Cytochrome Oxidase 1) from these three entities. In order to evaluate the phylogenetic species concept, the Maximum Parsimony analyses showed strong supported politomies (unresolved nodes), yielded solutions with no supported groups correlated with two or three morphological entities including the male haplotype identified as An. aquasalis. The genetic distances (K-2P) showed that the variability inter-morphotype is in the variance intra, suggesting that the haplotypes belong to the three morphotypes and represent a unique polymorphic species with phenotypic plasticity. We conclude that An. aquasalis is a unique taxonomic entity in the populations studied and also that the morphological characters such as: 1) medial vein with black scales and 2) maxillary palpus with ventral surface covered with white scales, proposed in most of the keys used are not valid characters to distinguish females of An. benarrochi from An. aquasalis as these characters belong to the intra-specific variation of An. aquasalis. This conclusion supports the Faran (1980) key, which did not report any morphological characters, showing undistinguished females under classical characters used.

Bacillus thuringiensis (Bt) se presenta como una alternativa atractiva para el control de Aedes aegypti por sus claras ventajas sobre insecticidas químicos, a saber: alta especificidad, inocuidad sobre el medio ambiente y lento desarrollo de resistencia. Las nuevas tendencias en formulaciones que utilizan agentes encapsulantes como almidón, o adsorción a partículas de arcilla, ayudan a proteger los productos Bt de factores que afectan su actividad, tales como la radiación UV, la temperatura y la degradación microbiana, mejorando la persistencia del producto, al tiempo que pueden actuar como fago-estimulantes. No obstante, es necesario evaluar estas propuestas en el contexto del control de Aedes aegypti, sobretodo en relación a la manipulación humana de los criaderos y el estado nutricional de la larva. Bt también ofrece la posibilidad de obtener productos variados que permitan la alternancia de aplicaciones y, posiblemente, productos que, de ser necesario, se adecuen a las necesidades específicas de cada región.

Bacillus thuringiensis is an attractive alternative for the control of Aedes aegypti for its clear advantages over chemical insecticides, high specificity, safety on the environment and slow development of resistance. New trends in formulations using encapsulating agents such as starch, or adsorption to clay particles that help protect the products of Bt factors affecting their activity, such as UV radiation, temperature and microbial degradation, enhance the persistence of the product, which can act as phage-type stimulants. However, it is necessary to evaluate these proposals in the context of the control of Ae. aegypti, especially in relation to the human manipulation of breeding sites and nutritional status of the larva. Bt also offers the possibility of obtaining products that enable a variety of alternate applications, and possibly products, if necessary, to suit the specific needs of each region.

Two new populations of Lutzomyia pseudolongipalpis Arrivillaga & Feliciangeli, species belonging to the Lutzomyia longipalpis (Lutz & Neiva) complex, are reported in Venezuela on diagnostic isoenzymes.

Dos nuevas poblaciones de Lutzomyia pseudolongipalpis Arrivillaga & Feliciangeli, especie del complejo Lutzomyia longipalpis (Lutz & Neiva), son registradas para Venezuela con base en dos enzimas diagnostico, Adenilato quinasa y Hexoquinasa.

Lutzomyia pseudolongipalpis, nueva especie vector de leishmaniasis visceral (LV) reportada para Venezuela, debe ser identificada taxonómicamente con base a dos criterios, los caracteres morfológicos deben ser utilizados para una diferenciación preliminar, y en segundo lugar, debe emplearse marcadores isoenzimáticos (adenilato quinasa y hexoquinasa), para especies dentro del complejo de especies Lutzomyia longipalpis, con fines de validación taxonómica.

Lutzomyia pseudolongipalpis, new vector species of visceral leishmaniasis (LV) reported for Venezuela, must be identified taxonomically by two criteria: morphological characters should be used for a preliminary differentiation, and secondly, be used isoenzymic markers (adenylate kinase and hexokinase), for species within the complex species Lutzomyia longipalpis, for taxonomic validation.

La fauna potencial de hospedadores-reservorios de Leishmania en Venezuela es poco conocida. La elaboración de listado de mamíferos señalados como infectados en el neotrópico, puede servir de base para la creación de mapas de distribución de hospedadores vertebrados potenciales en Venezuela. Se ha demostrado que los roedores son los hospedadores naturales más frecuentes de la Leishmania en la región neotropical, lo cual es una evidencia biológica para considerar a los modelos murinos como ideales en estudios in vivo de la leishmaniasis. Los inventarios faunísticos en estudios de leishmaniasis, indican que las familias Echimyidae, Cricetidae y Muridae son las más representativas. Para Venezuela, algunas especies de los géneros Oryzomys, Heteromys, Proechimys y Rattus se citan como infectadas, sin embargo, especies de Xenarthras, Didelphidae y carnívoros silvestres, aunque no han sido señalados infectados con Leishmania en el país, tienen una importancia epidemiológica potencial, basado en su capacidad de hospedador susceptible, ecología, y distribución geográfica concordante con focos de leishmaniasis. La asociación de estos mamíferos como posibles hospedadores-reservorios, con la presencia de Leishmania y con vectores infectados debería ser explicada con base en la dinámica poblacional y ecología de estos eslabones, y de la enfermedad. No obstante, los estudios parasitológicos de reservorios se fundamentan solo en búsqueda de infección natural, y no en explicar su rol en el ciclo de transmisión. Estudios de ecología de poblaciones de mamíferos, deben ser obligatorios en áreas leishmaniasis, para la comprensión de la dinámica epidemiológica y en especial para el diseño estrategias multidisciplinarias más efectivas para el manejo de la enfermedad.

The potential host-reservoir fauna for Leishmania in Venezuela is not well known. The infected mammals checklist for the neotropical region, can be useful as base of design of distribution maps for potential hosts in Venezuela. Rodents are the most important hosts for Leishmania in the neotropics, which is a biological evidence for the use of murine models for in vivo studies in leishmaniasis. The animal surveys in leishmaniasis studies have shown that the families Echimyidae, Cricetidae and Muridae are the most representative hosts. In Venezuela, species belonging to Oryzomys, Heteromys, Proechimys and Rattus genera have been reported as infected by Leishmania. However, species of Xenarthra, Didelphydae and wild carnivores have not been reported infected, and these are potentially epidemiological important, based on their susceptible host capacity, their ecology and the congruent geographical distribution with leishmaniasis foci. The association of these mammals as potential hosts-reservoirs with the occurrence of Leishmania and also with the infected vectors must be explained based on the population dynamics and ecology of these links and the disease. Nevertheless, the parasitological studies on reservoirs are supported in the search of natural infection only, without finding their role in the transmission cycle. Population ecology studies in mammals must be mandatory in leishmaniasis areas, in order to understand the epidemiological dynamic and especially to design more effectives multidisciplinary strategies for the disease management.

Lutzomyia pseudolongipalpis y Lutzomyia longipalpis (especie C2, L. n. sp) son dos especies de flebotominos vectores endémicos de Venezuela, simpátricas, monofiléticas, con profundas divergencias, morfológicamente diferentes y pertenecientes al complejo de especies L. longipalpis. El estudio de su aislamiento reproductivo es clave para entender el proceso de especiación y el mantenimiento de estas dos especies hermanas como entidades taxonómicas y biológicas discretas. Por tal motivo, se realizaron ensayos de entrecruzamiento homo y heteroespecíficos, los cuales fueron monitoreados por dos criterios: biológico (presencia de cópula y progenie) y genético (utilizando dos marcadores isoenzimáticos diagnósticos para el complejo L. longipalpis, las enzimas AK y HK). Los resultados indican aislamiento reproductivo, con un intercambio genético asimétrico hacia la hibridización en condiciones experimentales, y producción de un bajo número de heterocigotos, lo que apoya la existencia de selección negativa sobre los híbridos y explica su ausencia en condiciones naturales en la localidad simpátrica.

Asymmetric reproductive isolation between Lutzomyia pseudolongipalpis and Lutzomyia longipalpis (species C2), Neotropical vectors of visceral leishmaniasis (Diptera: Pshychodidae). Lutzomyia pseudolongipalpis and Lutzomyia longipalpis (species C2, L. sp n.) are two endemic species of Phlebotominae sand fly vectors from Venezuela. The two insects are sympatric and monophyletic but have deeply diverging, morphological differences. They belong to the L. longipalpis complex. A study of their reproductive isolation is necessary to understand the process of speciation and maintenance of the two sister species as two discrete taxonomic and biological entities. Cross-mating tests were conducted (homo and hetero-specific) and monitored under two criteria: biological (presence of copulation and offspring) and genetic (using two isozymic markers diagnostic for the L. longipalpis complex; enzyme diagnosis AK and HK). Results indicate reproductive isolation, with an asymmetrical genetic exchange in a direction of hybridization between the two species under experimental conditions, and production of a low number of heterozygotes. These findings support the existence of negative selection on hybrids, and explain the absence of hybrids under natural conditions, in the sympatric locality. Rev. Biol. Trop. 57 (1-2): 23-31. Epub 2009 June 30.

Los sistemas fluviales han estado sometidos a la fuerte presión humana, debido a la intervención no planificada que ha desencadenado un mal manejo de aguas potencialmente potables para consumo humano y riego. Estos cambios han promovido cambios microclimáticos importantes, afectando el nicho de la fauna acuática, por ser un taxa cuya dinámica es muy susceptible a perturbaciones. En el contexto del desarrollo sustentable con perspectivas hacia el aprovechamiento y conservación de ambientes acuáticos, los bioindicadores juegan un papel importante en el manejo adecuado de los recursos. Un bioindicador puede ser definido como un conjunto de especies que poseen requerimientos particulares con relación a un grupo de variables físicas o químicas, tal que los cambios de estas variables indiquen para las especies involucradas que el sistema se encuentra en los límites de las curvas del óptimo ecológico. Las comunidades de macroinvertebrados son los mejores bioindicadores de contaminación acuática, debido a que son muy abundantes, se encuentran en prácticamente todos los ecosistemas de agua dulce y su recolección es simple y de bajo costo. Los órdenes de insectos utilizados en este estudio para estimar la calidad ambiental son: Ephemeroptera, Trichoptera, Plecoptera, Diptera, Odonata y Coleoptera. En este trabajo se presentan a los macroinvertebrados acuáticos como indicadores biológicos, y su utilidad a partir del empleo de los índices bióticos para estimar la tolerancia del bentos a los contaminantes (BMWP, IBMW, BMWQ, IBF, EPT, el porcentaje de raspadores y la abundancia de Chironomidae) así como las respuestas funcionales de estos organismos a los contaminantes. El aumento de estudios de bioindicadores conllevara a la mejor comprensión de cómo y de qué manera es afectado un ecosistema de agua dulce por un contaminante.

The fluvial system has been under strong human pressure, due to a lack of urban planning, which has triggered a potentially dangerous potable water problem for human consumption and irrigation. These changes in the quality of the fluvial systems have promoted important microclimatic changes, within the niche of special aquatic fauna, macroinvertebrates, that have a susceptible population dynamics to habitat disturbances. For sustainable development it is necessary to consider aquatic atmosphere conservation and to propose an adequate management plan, which includes bioindicators as a potential tool, to evaluate the perturbation grade and monitor the fluvial system within the water conservation plan. A bioindicador is defined as a set of species, with specific requirements in relation to physical or chemical variables, so that the significant changes of these variables indicates for the species that the system is perturbed and the species are close to tolerance limits. The assemblages of macroinvertebrates are the best bioindicators of contaminated water, because they are very abundant, are present in all the fresh water ecosystems, easy to collect and monitoring is low cost. The taxa to consider for environmental quality are: Ephemeroptera, Trichoptera, Plecóptera, Diptera, Odonata and Coleóptera. In this work we suggest the use of these aquatic macroinvertebrates as biological bioindicators, and their utility as biotic indices to estimate the tolerance of benthos to the polluting agents (BMWP, IBMW, BMWQ, IBF, EPT, the percentage of scrapers and the abundance of Chironomidae) as well as the functional response of these organisms to the polluting agents. Increasing studies of biomarkers leads to a better understanding of how fresh water is affected by a pollutant.

Introducción. La terapia con larvas ha sido ampliamente utilizada para el tratamiento de lesiones ulcerativas de la piel; existen registros de enfermedades, como podopatía diabética, osteomielitis y úlceras varicosas, en las cuales el uso de la terapia con larvas ha promovido la cicatrización de la lesión en presencia de patógenos bacterianos resistentes a los antibióticos convencionales. Objetivo. Realizar una prueba piloto de terapia con larvas de Lucilia sericata sobre lesiones cutáneas producidas por Leishmania amazonensis . Materiales y métodos. En el presente trabajo se empleó un diseño experimental en animales ( Mesocricetus aureatus , tres réplicas) con la finalidad de analizar las variaciones del tamaño de la lesión por leishmaniasis antes y después de la terapia con larvas de L. sericata , utilizando criterios para la evaluación de la terapia tales como tamaño de la lesión, tiempo de aplicación y presencia de edema y secreción. Resultados. Indican una cicatrización efectiva y curación de las lesiones localizadas después de la terapia con larvas de L. sericata (80% a 100% de reducción del área de la lesión en 12 horas). Discusión. Los resultados preliminares indican que las larvas de moscas L. sericata son de uso potencial como terapia natural alternativa médica y veterinaria para la leishmaniasis cutánea.

Introduction. Maggot debridement therapy has been widely used for treating a variety of scarred-over soft-tissue wounds. Published accounts record several illnesses in which treatment with larval therapy has promoted injury healing in conjunction with infection by bacterial pathogens resistant to conventional antibiotics. Objective. An initial test of the maggot therapy was developed for cutaneous injuries produced by Leishmania amazonensis. Materials and methods. An experimental design based on an animal model with three replicates in Mesocricetus aureatus (Rodentia: Muridae) was used to evaluate size variation lesion before and after after larval therapy with Lucilia sericata maggots . The criteria used for therapy evaluation were lesion size, maggot application time, and presence or absence of edema and secretions. Results. Effective scarring and wound healing was observed after therapy with L. sericata larvae, i.e. 80% to 100% lesion area reduction after 12 hours. Conclusion. The preliminary results suggest that fly maggots of L. sericata have a potential use as natural medical and veterinary alternative therapy for the cutaneous leishmaniasis.